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骨髓间充质干细胞治疗小儿脑瘫的临床应用

时间:2019-07-01 09:16来源: 未知 作者:admin 点击:
 
  • 选择患者
(一)适应证
骨髓间充质干细胞移植对任何原因引起的小儿脑瘫均有效,平均有效率约为70%~80%,其中治疗效果明显的程度依次为痉挛型、徐动型及徐动与痉挛的混合型、偏瘫型,共济失调型、失张力型及同时伴有智力障碍者疗效稍差。骨髓间充质干细胞移植对脑瘫引起的脾气暴躁、攻击行为,甚至自闭症均有改善。此外,骨髓间充质干细胞移植还可改善脑瘫患儿因口腔肌张力高所致的口齿不清,流涎,咀嚼、吞咽困难等症状。
 
(二)禁忌证
对于患有出血性疾病、严重高敏体质、恶性肿瘤患者或易感人群;严重的消化道疾病、活动性结核病及未控制的癫痫等不宜使用大剂量激素治疗的患者;手术区域皮肤感染等也应考虑暂缓手术。
 
二、干细胞移植前的围术期处理(术前准备)

(一)患者的准备
对患者及家属做好充分解释工作,使患儿及家长对其疾病及目前国内外小儿脑瘫治
疗的发展现状有所认识,并告知骨髓间充质干细胞移植治疗小儿脑瘫的机制、治疗方案
质的选择,同时针对患儿本人个体化分析可能取得的疗效与风险及疗效预测,并签署知情
的同意书。术前做头颅磁共振、心电图、脑电图、胸片、血常规、肝肾功能及出、凝血功
能检查排除手术禁忌证。此外,还应检查肝炎性病等血行传播性疾病。

(二)实验室的处理

骨髓采集手术前需做血常规、血型、血生化、肝炎、性病、出凝血功能及心电图等检查,确保无手术禁忌证即可安排手术。采骨髓前一天做好个人卫生工作,包括洗头、洗澡、换清洁内衣,保证充足睡眠。进入手术室在严格无菌条件下抽取患儿自体骨髓液,肝素盐水抗凝。利用间充质干细胞贴壁生长的特性,每次换液弃去悬浮生长的非间充质细胞和生长状态较差的干细胞,即用贴壁法分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞。我们的前期试验研究发现第4 ~ 6代的骨髓间充质干细胞是活力最旺盛的、细胞因子分泌量最多的、用于组织修复效果最好的细胞。
 
三、干细胞移植的方法、步骤和措施

通常骨髓间充质干细胞移植治疗小儿脑瘫的术式有:头颅立体定向干细胞移植、腰椎穿刺蛛网膜下腔干细胞移植、静脉输注干细胞移植等。根据患儿的脑瘫类型、权衡病情轻重及年龄因素等差异,制订个体化的治疗方案。每一个疗程中可以交叉使用上述术式以起到协同作用、取得最佳疗效。
 
四、干细胞移植的术后处理

由于自体骨髓间充质干细胞移植不存在移植物抗宿主反应及排斥反应,故不需要使用免疫抑制剂等抗排异药物。术后常规给予抗感染、止痛、补液等对症治疗,并进行适当的康复锻炼。
 
五、干细胞移植的术后评价

(一)安全性评价
术前对植入的细胞常规进行相应的生物安全性检测,包括病原微生物污染及致热原的检测等。干细胞与肿瘤之间的关系长期以来一直被干细胞工作者广泛关注。细胞无限增殖的特性是肿瘤细胞与干细胞的共性。有学者认为,肿瘤的发生是由于肿瘤干细胞发生而来,而肿瘤干细胞与正常成体F细胞之间的关系尚在研究中。

有实验研究体外培养的自体骨髓间充质神经F细胞的致瘤性。对脐m自体骨髓间充质神经千细胞分别进行细胞形态学观察、刀豆球蛋白A凝集试验和双层软琼脂培养,观察干细胞是否具有恶变细胞的形态特征.表面结构及生长特性的变化;利用免疫细胞化学的方法检测自体骨髓间充质神经千细胞的端粒酶和肿瘤相关基因的表达;将自体骨髓间充质神经千细胞接种到裸鼠体内观察其成瘤性。结果自体骨髓间充质神经干细胞不具有恶性转化细胞的形态特征,在不同刀豆球蛋白A浓度下均未见明显的凝集反应,在双层软琼脂培养基不能形成
细胞克隆;自体骨髓间充质神经干细胞的c-myc、c-fos 和P53基因均呈阴性表达,而端粒酶反转录酶呈弱阳性表达;将自体骨髓间充质神经干细胞接种于裸鼠皮下6个月未见肿瘤形成,亦未见其他组织形成。也就是说,自体骨髓间充质神经干细胞不具有恶性变的细胞生物学特征,体内和体外的各项指标均未提示其具有致瘤性,体外的培养条件没有使其发生恶性转化,从致瘤性方面证实了自体骨髓间充质神经干细胞临床移植的安全性。
然而,术后长期随访对致畸性、致瘤性等安全性监测是不可忽视的。

(二)有效性评价

经过大量的动物实验和临床试验证实骨髓间充质干细胞对中枢神经系统损伤具有较强的功能修复作用。对每一个接受干细胞移植手术的患者,于术前及术后3周、半年、1年、2年等不同的时间进行大运动量表、精细运动量表及认知功能的评价。

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