干细胞
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干细胞治疗失代偿期肝硬化的围术期处理--术前准备

时间:2019-07-03 09:30来源: 未知 作者:admin 点击:
患者的准备签署知情同意书;食管胃底静脉曲张出血者,可先给予食管静脉曲张套扎和胃底静脉组织粘合剂治疗,出血停止后再行干细胞治疗。HBV-DNA定量大于10,且伴有ALT升高大于正常值2.5倍患者、同时给予拉米夫定口服,每日1次;大量腹水影响呼吸并伴严重低蛋白血症,可根据病情临时给予放復水和输白蛋白治疗。

实验室的处理一干细胞制备脐血T细胞分离方法为:分离前用乙醇擦拭超净台等物品。然后用紫外线灯消毒30分钟(包括外房间)。①采用加拿大威尔森公司研制的脐带血有核细胞体外分离试剂盒,将含有肝素抗凝的脐带血120ml转至200ml的A液瓶内。2)第1 步后液体总体积与B液按4: 1的比例加入B液,容器封闭后充分混匀,室温静置(静置期间不得再摇动容器)约20~ 30分钟。③20~30分钟后,观察有明显的红细胞沉降至最下层时,用25ml移液管将.上层液体(约占全容量的3/5)移至50ml无菌离心管中,每管50ml,尽量不吸红细胞层。④将收集到离心管中的液体,于离心机中离心,2500rpm 离心5分钟。⑤取第4步离心后的离心管,弃上清,每管加注射用盐水7~10ml(用手指弹底部制成细胞悬液),收集离心管底部的细胞,三管并一管。⑥取两支新的50ml离心管,加人25mlC液。⑦将第5步所得细胞悬液沿离心管壁缓缓加人到装有25mlC液的离心管中,注意加入速度要慢,这一步称为鸡尾酒加法。⑧将第7步的离心管1200rpm离心20分钟。⑨离心后吸取中间云雾状的薄层加至新的离心管中,用注射用生理盐水洗涤共三次(第一次离心条件为2500rpm离心5分钟;第2次2000rpm离心5分钟;第3次1800rpm离心5分钟)。①收集细胞备用(加生理盐水5ml制成细胞悬液,取0.2ml使用台盼蓝染色法检测细胞存活率。细胞活力大于90% (死细胞染色,活细胞不染色),所提取的细胞总数计算用细胞计数板计数法(或者血球计数仪计数法)。

 
干细胞移植的方法、步骤和措施
 
采用加拿大威尔森公司研制的脐济带血下细自体外分离试剂盒,从60~ 120ml脐带山中提取CD34"、.CD117、CD133*、 C-kit和Sa-1+干细胞,总数大于1x10个,细活力大于96%。生理盐水10ml制成干细细胞悬液,经股动脉插管至肝固有动脉,2分钟内缓慢注入。
 
干细胞移植术后的处理
 
干细胞治疗后给予促肝细胞生成素,每日120mg静脉滴注,连续7天。经股动脉插管介,入治疗后给予抗生素治疗3天。
 
干细胞移植术后评价
 
1.安全性评价
治疗期间如实填写不良事件记录表。记录不良事件的发生时间、严重程度、持续时间、采取的措施和转归。我们所做的40例失代偿期肝硬化患者, 1例干细胞治疗过程中患者出现心慌、腹部灼热感等,为血管造影反应,无其他严重不适。干细胞治疗后观察期,2例出现穿刺点局部血肿,2天内患者可正常行走;术后出现低热1例,1天内恢复正常;术后出现腹胀者1例,短期内缓解。无严重并发症出现。
 
2.有效性评价
观察治疗干细胞治疗前及治疗后1、2、4周患者临床症状(腹胀、食欲缺乏、乏力、腹水)变化。腹胀、食欲缺乏、乏力症状改善以分级积分方法记录:很显著(4分),显著(3分),一般(2分),没有(1分)。腹水记分:大量(4分),中等(3分),少量(2分),无(1分)。观察治疗干细胞治疗前及治疗后1、2、4周患者肝脏功能(白蛋白、凝血酶原时间、纤维蛋白酶原、胆红素)及Child-Pugh分级变化。
 
干细胞移植术后不良反应的处理
 
我们用脐带血干细胞治疗的40例患者,无严重不良反应。1例干细胞治疗过程中患者出现心慌、腹部灼热感等,为血管造影反应,给予地塞米松5mg静脉推注。术后出现低热1例,1天内恢复正常,未用退烧药;术后出现腹胀者1例,短期内缓解。

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